Алгоритм определения белка в моче экспресс методом. Стандарт «Определение белка в моче экспресс методом»

Небольшое количество белка в суточной моче обнаруживается и у вполне здоровых лиц, однако такие небольшие концентрации не выявляют в разовых порциях используемыми в настоящее время методами. Приблизительно 70% белков мочи здорового человека приходится на долю уромукоида - белка, являющегося продуктом почечной ткани; таким образом, доля гломерулярного белка в моче здоровых людей является ничтожно малой и протеинурия в норме составляет 50-150 мг/сут, причем большинство белков мочи идентично сывороточным.

Принято различать следующие формы протеинурии в зависимости от места возникновения: преренальную, связанную с усиленным распадом белка тканей, выраженным гемолизом; ренальную, обусловленную патологией почек, которая может быть разделена на клубочковую и канальцевую; постренальную, связанную с патологией мочевыводящих путей и чаще всего обусловленную воспалительной экссудацией.

В зависимости от длительности существования выделяют постоянную протеинурию, существующую в течение многих недель и даже лет, и преходящую, появляющуюся периодически, иногда даже при отсутствии патологии почек, например при лихорадке и выраженной интоксикации. Целесообразно различать вариабельность протеинурии: при суточной потере белка до 1 г - умеренную, от 1 до 3 г - среднюю и более 3 г - выраженную.

Обнаружение в моче белков с относительно большой молекулярной массой свидетельствует об отсутствии избирательности почечного фильтра и выраженном его поражении. В этих случаях говорят о низкой селективности протеинурии. Поэтому в настоящее время широкое распространение получило определение белковых фракций мочи. Наиболее точны методы электрофореза в крахмальном и полиакриламидном геле.
По результатам, полученным этими методами, можно судить о селективности протеинурии.

Большинство качественных и количественных методов определения белка в моче основаны на его коагуляции в объеме мочи или на границе сред (мочи и кислоты); если есть способ измерить интенсивность коагуляции, то проба становится количественной.

Унифицированная проба с сульфосалициловой кислотой:

Необходимый реактив:

20%-ный раствор сульфосалициловой кислоты.

Ход исследования:

В 2 пробирки наливают по 3 мл профильтрованной мочи. В опытную пробирку прибавляют 6-8 капель реактива. На темном фоне сравнивают контрольную пробирку с опытной. Помутнение в опытной пробирке указывает на наличие белка, пробу считают положительной.

Если реакция мочи щелочная, то перед исследованием ее подкисляют 2-3 каплями 10%-ного раствора уксусной кислоты.

Унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова:

В основу метода положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что на границе азотной кислоты и мочи при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.

Необходимый реактив:

30%-ный раствор азотной кислоты (относительная плотность 1,2) или реактив Ларионовой.
Приготовление реактива Ларионовой: 20-30 г хлорида натрия растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, дают остыть, фильтруют. К 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной азотной кислоты.

Ход исследования:

В пробирку наливают 1-2 мл азотной кислоты (или реактива Ларионовой) и осторожно, по стенке пробирки, наслаивают такое же количество профильтрованной мочи. Появление тонкого белого кольца на границе двух жидкостей между 2 и 3-й минутой указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. Если кольцо появляется раньше 2 мин после наслаивания, мочу следует развести водой и провести повторное наслаивание уже разведенной мочи. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, т.е. его ширины, компактности и времени появления. При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком - в 4 раза, при компактном - в 8 раз и т.д. Концентрацию белка при этом вычисляют путем умножения 0,033 на степень разведения и выражают в граммах на 1 л (г/л).

Иногда белое кольцо получается при наличии больших количеств уратов. В отличие от белкового кольца уратное появляется немного выше границы между двумя жидкостями и растворяется при легком нагревании.

Количественное определение белка в моче по помутнению, образующемуся при добавлении сульфосалициловой кислоты:

Принцип метода:

Интенсивность помутнения при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой пропорциональна его концентрации.

Необходимые реактивы:

1. 3%-ный раствор сульфосалициловой кислоты.

2. 0,9%-ный раствор хлорида натрия.

3. Стандартный раствор альбумина - 1%-ный раствор (1 мл раствора, содержащий 10 мг альбумина): 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора хлорида натрия в колбе вместимостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же раствором. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5%-ного раствора азида натрия (NaN3). При хранении в холодильнике реактив годен в течение 2 месяцев.

Специальное оборудование - фотоэлектроколориметр.

Ход исследования:

В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, доливают до 5 мл 3%-ным раствором сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете длиной оптического пути 5 мм. Контролем служит пробирка, в которой к 1,25 мл профильтрованной мочи долили до 5 мл 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику, для построения которого из стандартного раствора готовят разведения, как указано в таблице.

Из каждого полученного раствора берут 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

Ложноположительные результаты могут быть получены при наличии в моче контрастных веществ, содержащих органический йод. Поэтому тест нельзя использовать у лиц, принимающих препараты йода; ложноположительный результат может быть также обусловлен приемом сульфаниламидных препаратов, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.

Биуретовый метод:

Принцип метода:

Пептидные связи белка с солями меди в щелочной с образуют комплекс фиолетового цвета. Белки предварительно осаждают трихлоруксусной кислотой.

Необходимые реактивы:

1. 10%-ный раствор трихлоруксусной кислоты.
2. 20%-ный раствор меди (CuSO4∙5H2O).
3. 3%-ный раствор NaOH.

Ход исследования:

К 5 мл мочи, взятой из суточного количества, прибавляют 3 мл раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугируют до постоянного объема осадка. Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой, осадок затем растворяют в 5 мл раствора NaОН. К раствору добавляют 0,25 мл CuSO4, смесь перемешивают и центрифугируют. Надосадочную жидкость фотометрируют при длине волны 540 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм против дистиллированной воды. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочной кривой, при построении которой на оси ординат откладывают концентрацию белка (г/л), а на оси абсцисс - оптическую плотность в единицах экстинкции. По полученной концентрации рассчитывают суточную потерю белка с мочой.

С помощью индикаторной бумаги (полосок):

Белок может быть обнаружен с помощью индикаторной бумаги (полосок), которые выпускаются фирмами “Albuphan”, “Ames” (Англия), “Albustix”, “Boehringer” (Германия), “Comburtest” и др.

Принцип основан на феномене так называемой протеиновой ошибки некоторых кислотно-щелочных индикаторов. Индикаторная часть бумаги пропитана тетрабромфеноловым синим и цитратным буфером. При увлажнении бумаги буфер растворяется и обеспечивает соответствующий рН для реакции индикатора.

При 3,0-3,5 аминогруппы белков реагируют с индикатором и меняют его первоначально желтую окраску на зеленовато-синюю, после чего, сравнивая с цветной шкалой, можно ориентировочно оценить концентрацию белка в исследуемой моче. Основной предпосылкой правильной работы индикаторных полосок является обеспечение pH в диапазоне 3,0-3,5 для протекания реакции.

Если бумага находится в контакте с исследуемой мочой дольше экспозиции, указанной в инструкции, то цитратный буфер в ней растворяется, и тогда индикатор реагирует на истинный рН мочи, т.е. дает ложноположительную реакцию. В связи с тем, что емкость буфера ограничена, то даже при соблюдении методических указаний в пробах слишком щелочной мочи (pH > 6,5) получаются ложноположительные результаты, а в пробах слишком кислой мочи (рН
Число реагирующих аминогрупп в составе отдельных белков различно, поэтому альбумины реагируют в 2 раза интенсивнее, чем такое же количество γ-глобулинов (белок Бенс-Джонса, парапротеины), и гораздо интенсивнее, чем гликопротеиды. Однако при большом количестве слизи с высоким содержанием гликопротеидов (при воспалении мочевыводящих путей) оседающие на индикаторной полоске хлопья слизи могут давать ложноположительные результаты.

Чувствительность отдельных производственных серий индикаторной бумаги, равно как и отдельных видов бумаги, выпускаемых одной и той же фирмой, может быть различной, поэтому к количественной оценке белка этим методом следует относиться осторожно. Определение суточной потери белков с мочой при помощи индикаторной бумаги невозможно. Таким образом, индикаторная бумага уступает химическим пробам, в первую очередь пробе с сульфосалициловой кислотой, хотя и дает возможность быстрого исследования серии образцов.

Обнаружение в моче белка Бенс-Джонса:

Белок Бенс-Джонса может выделяться с мочой при миеломной болезни, макроглобулинемии Вальденстрема.

Исследование целесообразно проводить только при положительной пробе с сульфосалициловой кислотой. Индикаторная бумага для обнаружения белка Бенс-Джонса непригодна.

Принцип:

Основан на реакции термопреципитации. Методы, с помощью которых оценивают растворение белка Бенс-Джонса при температуре 100 °С или повторное осаждение при последующем охлаждении, ненадежны, так как далеко не все белковые тела Бенс-Джонса обладают соответствующими свойствами. Наиболее достоверно выявление этого парапротеина осаждением его при температуре 40-60 °С, но и в этих условиях осаждение может не произойти в слишком кислой (рН 6,5) моче, при низкой относительной плотности мочи и при низкой концентрации белка Бенс-Джонса.

Необходимый реактивы:

2 М ацетатный буфер рН 4,9.

Ход исследования:

Профильтрованную мочу в количестве 4 мл смешивают с 1 мл буфера и согревают в течение 15 мин на водяной бане при температуре 56 °С. При наличии белков Бенс-Джонса уже в течение 2 мин появляется выраженный осадок, при концентрации белка Бенс-Джонса менее 3 г/л проба может получиться отрицательной. На практике это встречается крайне редко, так как большей частью концентрация белка Бенс-Джонса в моче значительная.

С полной достоверностью белок Бенс-Джонса может быть обнаружен иммуноэлектрофоретическим исследованием при использовании специфических сывороток против тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов.

Определение альбумоз (протеоз):

Альбумозы - это продукты расщепления белков, принцип определения которых основан на том, что они не сворачиваются при кипячении, но дают положительную биуретовую реакцию и высаливаются некоторыми солями, особенно сульфатом аммония и ацетатом цинка в кислой среде.

Нормальная моча альбумоз не содержит. Следы могут быть в нормальной моче в случае примеси семенной жидкости. В патологии альбумозы могут встречаться в моче при лихорадочных состояниях, переливании крови и плазмы, рассасывании экссудатов и транссудатов, распаде опухолей.

Необходимые реактивы:

1. Насыщенный раствор хлорида натрия.
2. Концентрированный раствор едкого натра.
3. Слабый раствор сульфата меди (почти бесцветный).

Ход исследования:

К моче, подкисленной уксусной кислотой, прибавляют насыщенный раствор хлорида натрия (1/3 объема), кипятят и горячую жидкость фильтруют. Альбумозы проходят в фильтрат, в котором их присутствие определяют биуретовой реакцией. К фильтрату прибавляют 1/2 объема концентрированного раствора едкого натра и несколько капель слабого раствора сульфата меди. При положительной пробе получается красно-фиолетовое окрашивание.

При положительной пробе с сульфосалициловой кислотой мочу нагревают. Если муть исчезает и вновь появляется при охлаждении, это означает, что моча содержит альбумозы или белковое тело Бенс-Джонса.

Инструкция

Качественные методы определения белка в моче : метод Геллера, проба с 20% раствором сульфосалициловой кислоты, проба с кипячением и др. Полуколичественные методы: использование диагностических тест-полосок для определения белка в моче , метод Брандберга-Робертса-Стольникова. Количественные методы: турбидиметрические и колориметрические.

Определение белка в суточной моче в концентрации 0,033 г/литр и более является патологией. Как правило, в утренней порции мочи концентрация белка не превышает 0,002 г/л, а в суточной моче концентрация белка составляет не более 50-150 мг белка.

Источники:

• определение белка в моче

Моча является продуктом обмена веществ человека. Образуется она при фильтрации крови в почках, именно поэтому состав мочи дает четкую характеристику состояния организма человека.

Моча представляет собой сложный раствор, состоящий более чем из 150 соединений. Некоторые специфические вещества, например, ацетон, желчные кислоты, белок, глюкоза могут присутствовать только при определенных болезнях.

Для контроля над здоровьем человека, в первую очередь, необходимо определять количество мочи. Нормой считается образование 1-1,8 л мочи за сутки. Когда выделяется более 2 литров мочи - это является признаком возможного нарушения в работе почек, сахарного диабета и ряда других заболеваний. Если же в сутки образуется менее 0,5 литра мочи, существует закупорка мочеточника или мочевого пузыря.

Цвет мочи

Цвет выделяемой мочи зависит от множества факторов, поэтому может изменяться, начиная от светло-желтого до оранжевого. На присутствие тех или иных оттенков могут повлиять некоторые продукты питания, а также принимаемые человеком лекарственные препараты.

После приема лекарственных препаратов моча может окрашиваться и приобретать красноватый оттенок. Если человек активно двигается, при этом у него выделяется большое количество пота, моча будет иметь интенсивно желтый цвет, как и при приеме средств типа «Нитроксолина» или «Биомицина».

Если человек не принимал никаких красящих продуктов питания и лекарств, но цвет его мочи отличается от обычного, можно заподозрить наличие в организме какого-либо заболевания. Например, при болезнях печени моча будет иметь темно-желтый или зеленоватый цвет.

Присутствие крови в выделяемой моче явно свидетельствует о присутствии камня в или о почечном кровотечении, если при этом наблюдается и болевой синдром.

Если затруднено мочеиспускание - это может говорить о воспалительном процессе, вызванном какой-либо инфекцией в мочевом пузыре. А вот грязная и мутная моча свидетельствует о тяжелых заболеваниях почек.

Белок в моче

В крови у человека белок отсутствует или его количество настолько мало, что не определяются при помощи лабораторных анализов. В случае выявления в моче белка, необходимо провести повторные анализы, так как он может присутствовать при утреннем пробуждении человека, а также после тяжелой физической работы или нагрузки у спортсменов.

Определить визуально, присутствует ли белок в моче или нет, на 100% невозможно. Можно лишь догадываться, когда в моче имеется большое количество беловатого цвета хлопьев.

Если белок в моче повторно обнаруживается, это указывает на наличие какого-либо заболевания почек. Воспалительные процессы, происходящие в них, провоцируют небольшое увеличение количества белка. Если же с мочой его выделяется более 2 грамм - это тревожный сигнал.

Пиелонефрит - это воспалительное заболевание, при котором поражаются почечная лоханка, чашечки и паренхима. В большинстве случаев причиной воспаления является бактериальная инфекция. Полное выздоровление возможно лишь при своевременной диагностике, поэтому при появлении симптомов а необходимо тщательное обследование.

Оглавление [Показать]

Здоровый человек в сутки выделяет 1,0―1,5 л мочи. Содержание 8―10 мг/дл белка в ней - физиологическое явление. Суточная норма белка в моче 100―150 мг не должна вызывать подозрений. Глобулин, мукопротеин и альбумин - то из чего складывается общий белок в моче. Большой отток альбумина указывает на нарушения фильтрационного процесса в почках и называется протеинурией или альбуминурией.

Каждому веществу в моче отведена «здоровая» норма, а если колеблется показатель белка - это может говорить о патологии почек.

Общий анализ мочи подразумевает использование либо первой (утренней) порции, либо берут суточную пробу. Последняя предпочтительнее для оценки уровня протеинурии, так как содержание белка имеет выраженные суточные колебания. Мочу в течение суток собирают в одну емкость, измеряют общий объем. Для лаборатории, которая проводит анализ мочи на белок, достаточно стандартного образца (от 50 до 100 мл) из этой емкости, остальное количество не требуется. Для получения дополнительной информации дополнительно проводят пробу по Зимницкому, что показывает в норме ли показатели мочи в сутки.

Методы определения белка в моче
Вид	Подвиды			Особенности
Качественные	Проба Геллера			Исследование урины на наличие белка
	Тест с сульфосалициловой кислотой
	Анализ с кипячением
Количественные		Турбидиметрические	Белок из мочи взаимодействует с реагентом, в результате чего снижается его растворимость. В качестве реагентов используют сульфосалициловую и трихлоруксусную кислоты, бензетония хлорид.
		Колориметрические	С некоторыми веществами белок из мочи меняет цвет. На этом базируется биуретовая реакция и метод Лоури. Используются и другие реагенты – бриллиантовый синий, пирогаллоловый красный.
Полуколичественные			Дают относительное представление о количестве белка, результат интерпретируют по изменению цвета образца. К полуколичественным методам относятся тест-полоски и метод Брандберга-Робертса-Стольникова.

Вернуться к оглавлению

Белок в моче в норме у взрослого человека не должен превышать 0,033 г/л. При этом суточная норма не выше 0,05 г/л. Для беременных норма белка в суточной моче больше - 0,3 г/л., а в утренней моче такая же - 0,033 г/л. Отличаются нормы белка в общем анализе мочи и у детей: 0,036 г/л для утренней порции и 0,06 г/л в сутки. Чаще всего в лабораториях анализ проводят двумя методами, что показывают, сколько содержится белковой фракции в урине. Приведенные выше значения нормы справедливы для анализа, проведенного с сульфосалициловой кислотой. Если же использовали пирогаллоловый красный краситель, значения будут отличаться в три раза.

Вернуться к оглавлению

• фильтрация в почечных клубочках идет неправильным путем;
• всасывание в канальцах белка нарушено;
• некоторые заболевания оказывают на почки сильную нагрузку ― когда белок в крови повышен, почки банально «не успевают» его отфильтровать.

Остальные причины считаются непочечными. Так развивается функциональная альбуминурия. Белок в анализе мочи появляется при аллергических реакциях, эпилепсии, сердечной недостаточности, лейкозе, отравлениях, при миеломе, химиотерапии, системных заболеваниях. Чаще всего именно такой показатель в анализах пациента будет первым звоночком гипертонической болезни.

Повышение белка в урине может быть обусловлено факторами непатологической природы, поэтому потребуются дополнительные анализы.Вернуться к оглавлению

Количественные методы определения белка в моче дают погрешности, поэтому рекомендуют проводить несколько анализов, а затем использовать формулу для расчета корректного значения. Содержание белка в моче измеряют в г/л или в мг/л. Эти показатели белка дают возможность определить уровень протеинурии, предположить причину, оценить прогноз и определиться со стратегией.

Вернуться к оглавлению

Для полноценного функционирования организма необходим постоянный обмен между кровью и тканями. Он возможен только при условии наличия в кровеносных сосудах определенного осмотического давления. Белки плазмы крови как раз и поддерживают такой уровень давления, когда низкомолекулярные вещества легко переходят из среды с высокой их концентрацией в среду с более низкой. Потеря молекул белка ведет к выходу крови из своего русла в ткани, что чревато сильными отеками. Так проявляется умеренная и выраженная протеинурия.

Начальные стадии альбуминурии протекают бессимптомно. Пациент обращает внимание только на проявления основного заболевания, которое и является причиной появления в моче белка.

Следовой протеинурией именуют повышение уровня белка в урине из-за употребления определённых продуктов.Вернуться к оглавлению

Мочу для анализа собирают в чистую, обезжиренную емкость. Перед сбором показан туалет промежности, подмываться нужно с мылом. Женщинам рекомендуют закрыть влагалище кусочком ваты или тампоном, чтобы влагалищные выделения не повлияли на результат. Накануне лучше не употреблять спиртное, минеральную воду, кофе, острое, соленое и пищу, которая придает урине окраску (чернику, свеклу). Сильные физические нагрузки, длительная ходьба, стресс, повышенная температура и потоотделение, чрезмерное употребление белковой пищи или лекарственных препаратов перед сдачей мочи провоцируют появление белка в анализе мочи вполне здорового человека. Это допустимое явление называется следовой протеинурией.

Вернуться к оглавлению

Болезни почек, приводящие к потере белка:

• Амилоидоз. Нормальные клетки в почках замещаются амилоидами (белково-сахаридный комплекс), что не дает органу нормально работать. На протеинурической стадии амилоиды откладываются в почечных тканях, разрушают нефрон и, как следствие, почечный фильтр. Так белок попадает из крови в мочу. Эта стадия может продолжаться более 10-ти лет.
• Диабетическая нефропатия. Из-за неправильного обмена углеводов и липидов происходит разрушение кровеносных сосудов, клубочков и канальцев в почке. Белок в моче является первым признаком прогнозируемого осложнения сахарного диабета.
• Заболевания воспалительного генеза - нефриты. Чаще всего поражения затрагивают кровеносные сосуды, клубочки и чашечно-лоханочные системы, нарушая нормальный ход фильтрационной системы.
• Гломерулонефрит в большинстве случаев носит аутоиммунный характер. Больной жалуется на уменьшение количества мочи, боль в пояснице и повышение давления. Для лечения гломерулонефрита рекомендуют диету, режим и медикаментозную терапию.
• Пиелонефрит. В остром периоде протекает с симптоматикой бактериальной инфекции: озноб, тошнота, головная боль. Это инфекционное заболевание.
• Поликистоз почек.

В здоровом организме молекулы белка (а они довольно крупные по размеру) не способны пройти через фильтрационную систему почек. Поэтому белка в моче быть не должно. Этот показатель одинаковый и у мужчин, и у женщин. Если же анализ указывает на протеинурию, важно обратиться к врачу для выяснения причин. Специалист оценит, насколько повышен уровень белка, есть ли сопутствующая патология, как восстановить нормальное функционирование организма. Согласно статистическим данным, у женщины риск заболевания мочеполовой системы выше, чем у мужчины.

Принцип метода основан на коагуляции белка в моче в присутствии азотной (или 20% раствора сульфосалициловой) кислоты.

Ход работы : к 5 каплям мочи добавляют 1-2 капли азотной (или сульфосалициловой) кислоты. При наличии белка в моче появляется мутность.

Таблица. Обнаружение патологических компонентов мочи .

Примечание: при наличии в исследуемой моче глюкозы и белка определяют их количественное содержание.

Принцип метода : при взаимодействии белка с пирогаллоловым красным и молибдатом натрия образуется окрашенный комплекс, интенсивность окраски, которого пропорциональна концентрации белка в пробе.

Реактивы: Рабочий реагент – раствор пирогаллолового красного в сукцинат-ном буфере, калибровочный раствор белка с концентрацией 0,50 г/л

Ход работы:

Пробы перемешать, выдержать 10 мин. при комнатной температуре (18 -25ºС). Измерить оптическую плотность опытной (Dоп) и калибровочной пробы (Dк) против контрольной пробы при λ=598 (578-610) нм. Окраска стабильна в течении 1 ч.

Расчет: концентрацию белка в моче (С) г/л рассчитать по формуле:

С= Dоп/Dк×0,50

где: Dоп = Dк= C = г/л.

Нормальные величины: до 0,094 г/л, (0,141 г/сут)

Вывод:

Принцип метода : При окислении D-глюкозы кислородом воздуха под действием глюкозооксидазы образуется эквимолярное количество перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты (смесь фенола и 4 аминоантипирина - 4ААП) с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию глюкозы.

глюкозооксидаза

Глюкоза + О2 + Н2О глюконолактон + Н2О2

пероксидаза

2Н2О2 + фенол + 4ААП окрашенное соединение + 4Н2О

Ход работы : в две пробирки вносят по 1 мл рабочего раствора и по 0,5 мл фосфатного буфера. В первую пробирку добавляют 0,02 мл мочи, во вторую – 0,02 мл калибратора (калибровочный, стандартный раствор глюкозы, 10 ммоль/л). Пробы перемешивают, выдерживают 15 мин при температуре 370С в термостате и измеряют оптическую плотность опытной (Dоп) и калиб-ровочной (Dк) проб против рабочего реагента при длине волны 500-546 нм.

Расчет: С = Dоп/Dк  10 ммоль/л Dоп= Dк =

Вывод:

Примечание. При содержании сахара в моче более 1% ее необходимо разводить.

В настоящее время в биохимических лабораториях используется унифи-цированный экспресс-метод анализа мочи на глюкозу с помощью реактив-ной бумаги на глюкозу Глюкотест или с использованием комбиниро-ванных тест-полосок на РН, белок, глюкозу, кетоновые тела и кровь. Тест-полоски, опускают в сосуд с мочой на 1сек. и сравнивают окраску по шкале.

Определение белка с использованием индикатора пирогаллолового красного

Принцип метода основан на фотометрическом измерении оптической плотности раствора окрашенного комплекса, образующегося при взаимодействии молекул белка с молекулами комплекса красителя пирогаллоловый красный и молибдата натрия (Pyrogallol Red-Molybdate complex) в кислой среде. Интенсивность окраски раствора пропорциональна содержанию белка в исследуемом материале. Наличие детергентов в реактиве обеспечивает равнозначное определение белков разной природы и строения.

Реактивы. 1) 1,5 ммоль/л раствор пирогаллолового красного (ПГК): 60 мг ПГК растворяют в 100 мл метанола. Хранят при температуре 0–5 °С; 2) 50 ммоль/л сукцинатный буферный раствор pH 2,5: 5,9 г янтарной кислоты (НООС–СН2–СН2–СООН); 0,14 г оксалата натрия (Na2C2O4) и 0,5 г натрия бензоата (C6H5COONa) растворяют в 900 мл дистиллированной воды; 3) 10 ммоль/ л раствор кристаллогидрата молибдата натрия (Na2MoO4 × 2H2O): 240 мг молибдата натрия растворяют в 100 мл дистиллированной воды; 4) Рабочий реактив: к 900 мл сукцинатного буферного раствора добавляют 40 мл раствора ПГК и 4 мл раствора молибдата натрия. pH раствора устанавливают 2,5 с помощью 0,1 моль/л раствора соляной кислоты (НСl) и доводят его объем до 1 л. Реактив в таком виде готов к использованию и стабилен при хранении в защищенном от света месте и температуре 2–25 °С в течение 6 мес; 5) 0,5 г/л стандартный раствор альбумина.

Ход определения. В первую пробирку вносят 0,05 мл исследуемой мочи, во вторую пробирку - 0,05 мл стандартного раствора альбумина и в третью пробирку (контрольная проба) - 0,05 мл дистиллированной воды, затем в эти пробирки добавляют по 3 мл рабочего реактива. Содержимое пробирок перемешивают и через 10 минут фотометрируют пробу и стандарт против контрольной пробы при длине волны 596 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм.

Расчет концентрации белка в исследуемой пробе мочи осуществляют по формуле:

где С - концентрация белка в исследуемой пробе мочи, г/л; Апр и Аст- экстинкция исследуемой пробы мочи и стандартного раствора альбумина, г/л; 0,5 - концентрация стандартного раствора альбумина, г/л.

Примечания:

• окраска раствора (цветного комплекса) стабильна в течение одного часа;
• прямо пропорциональная зависимость между концентрацией белка в исследуемой пробе и поглощением раствора зависит от типа фотометра;
• при содержании белка в моче выше 3 г/л пробу разводят изотоническим раствором натрия хлорида (9 г/л) и повторяют определение. Степень разведения учитывают при определении концентрации белка.

См. также:

• Определение белка в моче
• Унифицированная проба с сульфосалициловой кислотой
• Унифицированный метод Брандберга–Робертса–Стольникова
• Определение количества белка в моче по реакции с сульфосалициловой кислотой
• Биуретовый метод
• Обнаружение в моче белка Бенс–Джонса

Протеинурия - явление, при котором в моче определяется белок, что указывает на возможность поражения почек, служит фактором развития болезней сердца, кровеносных, лимфатических сосудов.

Обнаружение белка в урине не всегда указывает на болезнь. Подобное явление свойственно даже для абсолютно здоровых людей, в урине которых может определяться белок. Переохлаждение, физические нагрузки, употребление белковой пищи приводит к появлению в моче белка, который без всякого лечения исчезает.

Во время скрининга у 17% практически здоровых людей определяется белок, но только 2% от этого числа людей положительный результат анализа служит признаком болезни почек.

Белковые молекулы не должны попадать в кровь. Они жизненно необходимы организму - являются строительным материалом для клеток, участвуют в реакциях в качестве коферментов, гормонов, антител. И у мужчин, и у женщин норма - полное отсутствие белка в моче.

Функция предотвращения потери организмом белковых молекул выполняется почками.

Фильтрацией мочи занимаются две системы почек:

1. почечные клубочки – не пропускают крупные молекулы, но не удерживают альбумины, глобулины – мелкую фракцию белковых молекул;
2. почечные канальца – адсорбируют белки, отфильтрованные клубочками, возвращают обратно в кровеносную систему.

В моче обнаруживаются альбумины (около 49%), мукопротеины, глобулины, из которых на долю иммуноглобулинов приходится около 20%.

Глобулины - сывороточные белки в большой молекулярной массой, которые вырабатываются в иммунной системе и печени. Большая их часть синтезируется иммунной системой, относится к иммуноглобулинам или антителам.

Альбумины - фракцию белков, которые первыми появляются в моче уже при незначительных поражениях почек. Некоторое количество альбуминов есть и в здоровой моче, но оно столь незначительно, что не выявляется с помощью лабораторной диагностики.

Нижний порог, который можно обнаружить при помощи лабораторной диагностики, составляет 0,033 г/л. Если в сутки теряется более 150 мг белка, то говорят о протеинурии.

Основные данные о белке в моче

Заболевание при легкой степени протеинурии протекает бессимптомно. Визуально мочу, не содержащую белка, невозможно отличить от урины, в которой есть незначительное количество белка. Несколько пенистой урина становится уже при высокой степени протеинурии.

Предположить активное выведение белка с мочой можно по внешнему виду больного лишь при средней или тяжелой степени болезни по появлению отеков конечностей, лица, живота.

На ранних стадиях заболевания косвенными признаками протеинурии могут служить симптомы:

• изменения окраски мочи;
• усиливающейся слабости;
• отсутствия аппетита;
• тошноты, рвоты;
• боли в костях;
• сонливости, головокружениям;
• повышенной температуры.

Появление подобных признаков нельзя оставлять без внимания, особенно при беременности. Подобное может означать и незначительное отклонение от нормы, а может оказаться симптомом развивающегося гестоза, преэклампсии.

Количественная оценка потери белка – задача непростая, для достижения более полного представления о состоянии больного пользуются несколькими лабораторными анализами.

Трудности в выборе способа выявления избыточного белка в моче объясняются:

• низкой концентрацией белка, для распознавания которой требуются высокоточные приборы;
• составом мочи, усложняющим задачу, так как она содержит вещества, искажающие результат.

Наибольшую информацию позволяет получить анализ первой утренней порции мочи, которую собирают после пробуждения.

Накануне проведения анализа необходимо соблюдать условия:

• не употреблять острой, жареной, белковой пищи, алкоголь;
• исключить прием диуретиков за 48 часов;
• ограничить физическую активность;
• тщательно соблюдать правила личной гигиены.

Утренняя моча наиболее информативна, так как длительно находится в мочевом пузыре, в меньшей степени зависит от приема пищи.

Анализировать количество белка в моче можно по случайной порции, которую отбирают в любое время, но такой анализ менее информативен, выше вероятность ошибки.

Для количественной оценки суточных потерь белка делают анализ общей суточной мочи. Для этого в течение 24 часов собирают в специальный пластиковый контейнер всю мочу, выделенную за день. Начинать сбор можно в любой момент времени. Главное условие – ровно сутки сбора.

Качественное определение протеинурии основано на свойстве белка денатурировать под действием физических или химических факторов. Качественные методы относятся к скрининговым, позволяющим установить наличие белка в моче, но не дающим возможности точно оценить степень протеинурии.

Используется пробы:

• с кипячением;
• сульфосалициловой кислотой;
• азотной кислотой, реактивом Ларионовой при кольцевой пробе Геллера.

Пробу с сульфосалициловой кислотой выполняют, сравнивая контрольный образец мочи с опытным, в котором к урине добавляют 7-8 капель 20% сульфосалициловой кислоты. Вывод о присутствии белка делают по интенсивности опалесцирующей мути, появляющейся в пробирке в ходе реакции.

Чаще применяют пробу Геллера с использованием 50% азотной кислоты. Чувствительность метода составляет 0,033 г/л. При такой концентрации белка в пробирке с образцом мочи и реагентом на 2-3 минутах после начала опыта появляется нитевидное кольцо белого цвета, образование которого и указывает на присутствие белка.

Проба Геллера

К полуколичественным методам относятся:

• способ определения белка в моче тест-полосками;
• метод Брандберга-Робертса-Стольникова.

Способ определения по методу Брандберга-Робертса-Стольникова основан на кольцевом методе Геллера, но позволяет более точно оценить количество белка. При выполнении теста по этой методике несколькими разведениями урины добиваются появления нитевидного белкового кольца во временном промежутке между 2- 3 минутами с начала тестирования.

В практике используется метод тест-полосок с нанесенным красителем бромфеноловым синим в качестве индикатора. Недостатком тест-полосок является избирательная чувствительность к альбумину, что приводит к искажению результата в случае повышения в моче концентрации глобулинов или других белков.

К минусам метода относится также относительно низкая чувствительность теста к белку. Реагировать на присутствие белка в моче тест полоски начинают при концентрации белка, превышающей 0,15 г/л.

Методы количественной оценки можно разделить условно на:

1. турбидиметрические;
2. колориметрические.

Методы основаны на свойстве белков снижать растворимость под действием связывающего агента с образованием малорастворимого соединения.

Агентами, вызывающими связывание белка, могут выступать:

• сульфосалициловая кислота;
• трихлоруксусная кислота;
• бензетоний хлорид.

О результатах тестов делают выводы на основании степени ослабления светового потока в образце с суспензией по сравнению с контрольным. Результаты этого метода не всегда можно отнести к достоверным из-за различий в условиях проведения: скорости смешивания реагентов, температуры, кислотности среды.

Влияют на оценку прием лекарственных препаратов накануне, перед проведением тестов по данным методам нельзя принимать:

• антибиотики;
• сульфаниламиды;
• йодсодержащие препараты.

Метод относится к доступным по себестоимости, что позволяет его широко использовать для скрининга. Но более точные результаты можно получить с помощью более дорогостоящих колориметрических методик.

К чувствительным методам, позволяющим точно определить концентрацию белка в моче, относятся колориметрические методики.

Сделать это с высокой точностью позволяют:

• биуретовая реакция;
• методика Лоури;
• окрашивающие методики, в которых используются красители, образующие с белками мочи комплексы, отличающиеся от образца визуально.

Колориметрические методы выявления белка в моче

Метод относится к надежным, обладающим высокой чувствительностью, позволяющий определять в моче альбумин, глобулины, парапротеины. Используется в качестве основного способа уточнения спорных результатов анализов, а также суточного белка в моче у больных нефрологических отделений стационаров.

Еще более точных результатов позволяет добиться метод Лоури, который основан на биуретовой реакции, а также реакции Фолина, распознающей триптофан и тирозин в молекулах белков.

Для исключения возможных ошибок пробу урину очищают с помощью диализа от аминокислот, мочевой кислоты. Ошибки возможны при употреблении салицилатов, тетрациклинов, хлорпромазина.

Наиболее точный способ определения белка основан на его свойстве связываться с красителями, из которых используются:

• понсо;
• кумасси бриллиантовый синий;
• пирогалловый красный.

В течение дня количество белка, выделяемое с мочой, изменяется. Чтобы более объективно оценить потери белка с мочой, вводят понятие суточного белка в моче. Эта величина измеряется в г/сутки.

Для быстрой оценки суточного белка в моче, в разовой порции мочи определяют количество белка и креатинина, затем по соотношению белок/креатинин делают вывод о потери белка в сутки.

Метод основан на том, что скорость выведения с мочой креатинина - величина постоянная, не изменяется в течение суток. У здорового человека в норме соотношение белок: креатинин в моче составляет 0,2.

Этот способ исключает возможные ошибки, которые могут возникнуть при сборе суточной мочи.

Качественные пробы чаще, чем количественные тесты, дают ложноположительные или ложноотрицательные результаты. Ошибки возникают в связи с приемом лекарств, особенностями питания, физической нагрузки накануне сдачи анализа.

Расшифровка этого качественного теста дается по визуальной оценке помутнения в пробирке в сравнении результата теста с контрольной:

1. слабоположительная реакция оценивается, как +;
2. положительная ++;
3. резко положительная +++.

Кольцевая проба Геллера более точно оценивает присутствие белка в моче, но не позволяет дать количественную оценку белка в моче. Как и тест с сульфосалициловой кислотой, проба Геллера дает лишь приблизительное представление о содержании белка в урине.

Метод позволяет оценить степень протеинурии количественно, но слишком трудоемок, неточен, так как при сильном разведении точность оценки снижается.

Чтобы вычислить белок, нужно умножить степень разведения мочи на 0, 033 г/л:

1	1	1: 2	0,066
1	2	1: 3	0,099
1	3	1: 4	0,132
1	4	1: 5	0,165
1	5	1: 6	0,198
1	6	1: 7	0,231
1	7	1: 8	0,264
1	8	1: 9	0,297
1	9	1: 10	0,33

Проведение теста не требует специальных условий, эту процедуру легко проделать в домашних условиях. Для этого необходимо тест-полоску опустить в мочу на 2 минуты.

Результаты будут выражаться количеством плюсов на полоске, расшифровка которой содержится в таблице:

1. Результаты тестирования, соответствующие значением до 30 мг/100 мл соответствуют физиологической протеинурии.
2. Значения на тест-полосках 1+ и 2++ означают значительную протеинурию.
3. Значения 3+++, 4++++ отмечаются при патологической протеинурии, вызванной заболеваниями почек.

Тест-полоски позволяют лишь приблизительно определить повышенный белок в моче. Для точной диагностики их не используют, а уж тем более они не могут сказать что это значит.

Не позволяют тест-полоски адекватно оценить количество белка в моче у беременных. Более надежным способом оценки служит определение белка по суточной моче.

Определение белка в моче при помощи тест-полоски:

Суточный белок в моче служит более точной диагностикой оценки функционального состояния почек. Для этого необходимо собрать всю мочу, выделяемую почками за сутки.

Допустимыми значениями для соотношения белок/креатинин считаются данные, приведенные в таблице:

При потере более 3,5 г белка в сутки состояние называется массивной протеинурией.

Если в моче много белка требуется повторное обследование через 1 месяц, затем через 3 месяца, по результатам, которых устанавливается почему норма превышена.

Причинами повышенного белка в моче является его увеличенное производство в организме и нарушение работы почек, различают протеинурию:

• физиологическую – незначительные отклонения от нормы вызываются физиологическими процессами, разрешаются самопроизвольно;
• патологическую – изменения вызываются в результате патологического процесса в почках или других органах тела, без лечения прогрессирует.

Небольшое повышение белка может наблюдаться при обильном белковом питании, механические ожогах, травмах, сопровождающихся усилением выработки иммуноглобулинов.

Легкая степень протеинурии может быть вызвана физической нагрузкой, психо-эмоциональным напряжением, приемом некоторых лекарств.

К физиологической протеинурии относится повышение белка в моче у детей в первые дни после рождения. Но уже после недели жизни содержание белка в моче у ребенка рассматривается, как отклонение от нормы и указывает на развивающуюся патологию.

Заболевания почек, инфекционные заболевания также иногда сопровождаются появлением белка в моче.

Подобные состояния соответствуют обычно легкой степени протеинурии, являются преходящими явлениями, быстро самостоятельно проходят, не требуя специального лечения.

Более тяжелые состояния, выраженная протеинурия отмечается в случае:

• гломерулонефрита;
• диабета;
• болезней сердца;
• раке мочевого пузыря;
• множественной миеломе;
• инфекции, лекарственном поражении, поликистозе почек;
• высоком кровяном давлении;
• системной красной волчанке;
• синдроме Гудпасчера.

Вызвать следы белка в моче может кишечная непроходимость, сердечная недостаточность, гипертиреоз.

Разновидности протеинурии классифицирует несколькими способами. Для качественной оценки белков, воспользоваться можно классификацией Ярошевского.

По систематике Ярошевского, созданной в 1971 году, различают протеинурию:

1. ренальную – куда входит нарушение клубочковой фильтрации, выделение белка канальцев, недостаточность реадсорбции белков в канальцах;
2. преренальная – возникает вне почек, выведение из организма гемоглобина, белков, возникающих в избытке в крови в результате множественной миеломы;
3. постренальная – возникает на участке мочевыводящих путей после почек, выведение белка при разрушении мочевыводящих органов.

Для количественной оценки происходящего выделяют условно степени протеинурии. Нужно помнить, что они могут легко переходить в более тяжелую без лечения.

Самая тяжелая стадия протеинурии развивается при потере более 3 г белка в сутки. Потеря белка от 30 мг до 300 мг в сутки соответствует умеренной стадии или микроальбумнурии. До 30 мг белка в суточной моче означает легкую степень протеинурии.

Норма белка в моче сколько?

1. В норме белок в моче практически отсутствует (менее 0,002 г/л) . Однако при некоторых состояниях небольшое количество белка может появляться в моче у здоровых лиц после приема большого количества белковой пищи, в результате охлаждения, при эмоциональных стрессах, длительной физической нагрузки (так называемая маршевая протеинурия) .

   Появление значительного количества белка в моче (протеинурия) является патологией. Причиной протеинурии могут быть заболевания почек (острый и хронический гломерулонефрит, пиелонефрит, нефропатия беременных и др.) или же мочевыводящих путей (воспаление мочевого пузыря, предстательной железы, мочеточников) . Почечная протеинурия может быть органической (клубочковая, канальцевая и избыточная) и функциональной (лихорадочная протеинурия, ортостатическая у подростков, при перекармливании грудных детей, у новорожденных) . Функциональная протеинурия не связана с почечной патологией. Суточное количество белка колеблется у больных от 0,1 до 3,0 г и более. Состав белков мочи определяется с помощью электрофореза. Появление в моче белка Бенс-Джонса характерно для миеломной болезни и макроглобулинемии Вальденстрема, #223;2 микроглобулина при повреждении почечных канальцев.

2. В норме белок в моче практически отсутствует (менее 0,002 г/л).
3. Основные признаки болезней, выявляемые при исследовании мочи.

   SG Удельный вес. Снижение удельного веса говорит об уменьшении способности почек концентрировать мочу и выводить из организма шлаки, что бывает при почечной недостаточности. Увеличение удельного веса связано с большим количеством в моче сахара, солей. Следует отметить, что оценивать удельный вес только по одному исследованию мочи нельзя, могут быть случайные изменения, надо повторно выполнить 1-2 раза анализ мочи.

   Proteine Белок в моче - протеинурия. Причиной протеинурии могут быть поражения самих почек при нефритах, амилоидозе, повреждении ядами. Белок в моче может появиться и вследствие болезней мочевыводящих путей (пиелонефрит, цистит, простатит) .

   Glucose Глюкоза (сахар) в моче - глюкозурия - чаще всего обусловлено сахарным диабетом. Более редкая причина - поражение почечных канальцев. Очень тревожно, если вместе с сахаром в моче определяются кетоновые тела. Это бывает при тяжелом, разрегулированном сахарном диабете и является предвестником самого тяжелого осложнения диабета - диабетической комы.

   Bilirubin, Urobilinogen Билирубин и уробилин определяются в моче при различных формах желтух.

   Erythrocytes Эритроциты в моче - гематурия. Это бывает или при поражении самих почек, чаще всего при их воспалении, или у больных с заболеваниями мочевых путей. Если, к примеру, по ним движется камень, он может ранить слизистую, в моче будут эритроциты. Распадающаяся опухоль почки тоже может привести к гематурии.

   Leukocytes Лейкоциты в моче - лейкоцитурия, чаще всего является следствием воспалительных изменений в мочевыводящих путях у больных пиелонефритом, циститом. Лейкоциты нередко определяются при воспалении женских наружных половых органов, у мужчин - при воспалении предстательной железы.

   Cylindrs Цилиндры - это своеобразные микроскопические образования. Гиалиновые цилиндры в количестве 1-2 могут быть у здорового человека. Они образуются в почечных канальцах, это слипшиеся между собой частички белка. Но увеличение их количества, цилиндры других видов (зернистые, эритроцитарные, жировые) всегда указывают на поражение самой ткани почки. Встречаются цилиндры при воспалительных заболеваниях почек, обменных поражениях, например, сахарном диабете.

   Информативность метода и его пределы. Информативность общего анализа мочи для распознавания конкретных заболеваний почек невысока, обычно требуется проведение дополнительных, более точных исследований. Но исследование это очень важно, особенно при проведении профилактических исследований, так как позволяет выявить ранние признаки заболеваний почек. Известно также, что нередко заболевания почек протекают скрыто, и только исследование мочи позволяет их заподозрить и провести дальнейшее необходимое обследование.

4. В большинстве лабораторий при исследовании мочи на белок сначала пользуются качественными реакциями, которые не обнаруживают белок в моче здорового человека. Если же белок в моче обнаружен качественными реакциями, проводят количественное (или полуколичественное) его определение. При этом имеют значение особенности используемых методов, охватывающих различный спектр уропротеинов. Так, при определении белка с помощью 3% сульфосалициловой кислоты, нормальным считается количество белка до 0,03 г/л, при использовании же пирогаллолового метода, граница нормальных значений белка повышается до 0,1 г/л. В связи с этим в бланке анализа необходимо указывать нормальное значение белка для того метода, которым пользуется лаборатория.

   При определении минимальных количеств белка рекомендуется повторить анализ, в сомнительных случаях следует определять суточную потерю белка с мочой. В норме суточная моча содержит белок в незначительных количествах. В физиологических условиях профильтровавшийся белок практически полностью реабсорбируется эпителием проксимальных канальцев и содержание его в суточном количестве мочи колеблется по разным авторам от следов до 20 50, 80 100 мг и даже до 150 200 мг. Некоторые авторы считают, что суточная экскреция белка в количестве 30 50 мг/сут является физиологической нормой для взрослого человека. Другие полагают, что выделение белка с мочой не должно превышать 60 мг/м2 поверхности тела в сутки, исключая первый месяц жизни, когда величина физиологической протеинурии может в четыре раза превышать указанные значения.

   Общим условием появления белков в моче здорового человека являются достаточно высокая их концентрация в крови и молекулярная масса не более 100 200 кДа.

5. это не норма, при вашем диагнозе такое возможно, другое дело, что для нефротического синдрома это вообще-то небольшой показатель.. смотрите на клинику - отеки, давление и т. д. продолжайте принимать назначенное лечение..
6. и все таки я скажу: в норме его НЕ дожно быть!

Алгоритм определения белка в моче экспресс методом.

Цель: Ранняя диагностика поздних гестозов.

Оснащение: судно, стерильная баночка, штатив с пробирками, флакон с 30% сульфосалициловой или уксусной кислотой, пипетка, спиртовая горелка.

1. Объясните беременной о необходимости данного исследова­ния.

2. Попросите беременную собрать мочу в стерильную баночку.

3. В пробирку налейте 4-5 мл. исследуемой мочи.

4. Проба с сульфосалициловой кислотой:

Добавьте в пробирку с мочой 6-10 капель 30% сульфосалици­ловой кислоты. При наличии белка в моче образуется осадок или муть.

5. Проба с уксусной кислотой:

В пробирку наливают 6-10 мл мочи и кипятят на спиртовой горелке - моча, содержащая белок, мутнеет. К помутневшей моче прибавляют несколько капель 3-5% раствора уксусной кислоты. Если муть исчезла - проба отрицательная.

Алгоритм определения биологической активности матки к родам. «Окситоциновый тест».

Цель: определение готовности организма к родам.

Оснащение: 0,9% - 500,0 физ.раствора, 5ЕД окситоцина, шприц 10,0, 70% спирт, вата, часы с секундной стрелкой.

1. Объясните беременной о необходимости данного исследования.

2. Попросите беременную в положении лежа на спине обеспе­чить себе полный эмоциональный и физический покой в течение 15 минут. Это необходимо для предупреждения возможных сокращений матки на воздействие различных факторов.

3. Наберите в 10-граммовый шприц 10 мл. раствора, приготовленного из расчета 0,01 ЕД окситоцина на 1 мл. изотонического раствора натрия хлорида. Раствор готовят следующим образом:

5 ЕД (1мл.) окситоцина разводят в 500 мл. изотонического раствора хлорида натрия (5 ИД: 500,0 = 0,01 ЕД: 1 мл). Из флакона 10-граммовым шприцем набирают 10,0 полученно­го раствора для проведения теста.

4. Проведите венепункцию и, убедившись, что она не вызвала сокращения матки, приступите к внутривенному введению раствора окситоцина.

5. Определите время начала введения раствора.

6. «Толчкообразно», по 1 мл. с интервалом 1 мин., введите рас­твор, но не более 5 мл. Введение раствора прекратите при появлении сокращений матки.

7. Тест считается положительным, если сокращение матки зарегистрировано в течение первых 3-х минут от начала инъекций и роды наступят в ближайшие 24-48 часов. Сокращение матки появившиеся после 4 мин от введения считается отрицательным тестом – роды наступят через 3 – 8 дней.

8. Результат зафиксируйте в первичной документации.

5.4. Алгоритм оценки «зрелости» шейки матки.

Цель: определение готовности шейки матки к родам.

Оснащение: дез.средство, ветошь, стерильные перчатки, таблица.

1.Объясните беременной о необходимости данной процедуры.

2.Обработайте кресло ветошью, смоченной в 0,5% раствором гипохлорита кальция

3. Постелите на кресло чистую пеленку.

4. Уложите беременную на гинекологическое кресло.

5. Обработайте наружные половые органы одним из дезинфицирующих растворов.

6. Наденьте стерильные перчатки.

7. Левой рукой, первым и вторым пальцами разведите большие половые губы, а 2-3 палец правой руки введите во влагали­ще.

В состав рабочего места по определению белка в моче входят следующие элементы:

1. Пробирки химические, агглютинационные.
2. Набор градуированных пипеток.
3. Пипетки с узким оттянутым концом.
4. Спиртовки или газовая горелка.
5. Черная бумага.
6. Ледяная уксусная кислота.
7. Сульфосалициловая кислота.
8. Концентрированная азотная кислота.
9. Дистиллированная вода.

Методики определения белка в моче

Все методики, применяющиеся для качественного определения белка в моче, основаны на свертывании белка. Свертывание белка проявляется выраженным в разной степени помутнением (от опалесценции до большой мутности) или выпадением хлопьев.

Качественное определение белка в моче может быть проведено одним из следующих способов:

1. кипячением с 10% раствором уксусной кислоты;
2. реакцией с 20% раствором сульфосалициловой кислоты;
3. реакцией с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера);
4. реакцией с 1% раствором азотной кислоты в насыщенном растворе поваренной соли (видоизмененная проба Геллера по Ларионовой).

Перед качественным определением белка в моче проводят следующую подготовительную работу:
1. Мутную мочу фильтруют через бумажный фильтр. Если получить прозрачный фильтрат не удается, производят повторное фильтрование через тот же фильтр или же смешивают мочу с небольшим количеством инфузорной земли или талька, после чего ее фильтруют.
2. Если моча имеет щелочную реакцию, ее подкисляют 10% раствором уксусной кислоты до слабокислой реакции под контролем лакмусовой или универсальной индикаторной бумажки.
3. При малом содержании солей (светло-желтая или бледно-желтая моча с малым удельным весом) к каждой
пробе добавляют несколько капель насыщенного раствора поваренной соли, так как недостаток солей обусловливает свертывание белка.
4. Степень помутнения наблюдают с помощью черного фона. В качестве фона используют черный картон или черную бумагу, применяемую в фотографии. Учет реакции на черном фоне позволяет выявить малейшую степень помутнения.

В отдельном штативе располагают пронумерованные пробирки. В них производят одну из описанных ниже реакций.

1. Проба кипячением с 10% раствором уксусной кислоты. Для постановки этой пробы необходим 10% раствор уксусной кислоты, который готовят следующим образом: 10 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.

Техника определения белка. В химическую пробирку помещают 10—12 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции. Затем верхнюю часть пробирки с мочой осторожно нагревают до кипения и добавляют в нее 8—10 капель 10% раствора уксусной кислоты. Пробирку с мочой рассматривают на черном фоне в проходящем свете. При наличии белка в моче появляется мутность разной степени (от опалесценции до большой мутности) или выпадают хлопья. Контролем служит нижняя часть пробирки, не подвергавшаяся нагреванию. Этой пробой обнаруживают количество белка, начиная с 0,015%о (%о — promille).

2. Реакция с 20% раствором сульфосалициловой кислоты. 20 % раствор сульфосалициловой кислоты готовят следующим образом: 20 г сульфосалициловой кислоты растворяют в 70-80 мл дистиллированной воды, переводят в цилиндр емкостью 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Приготовленный реактив хранят в посуде из темного стекла.

Техника определения белка. В две пробирки одинакового диаметра помещают по 2—3 мл отфильтрованной мочи слабокислой реакции, в одну из пробирок к моче прибавляют 3—4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты, другая пробирка служит контролем. При наличии белка в пробирке с реактивом появляется мутность или выпадают хлопья свернувшегося белка. В контрольной пробирке жидкость остается прозрачной. Сульфосалициловая кислота наряду с белком сыворотки осаждает альбумозы (пептиды), представляющие собой продукт распада белка. С целью уточнения причины помутнения мочи пробирку с мочой подогревают. Мутность, причиной образования которой оказались сывороточные белки, усиливается, мутность же, обусловленная присутствием альбумоз, исчезает. Эта проба имеет ту же чувствительность, что и предыдущая.

3. Реакция с 50 % раствором азотной кислоты (проба Геллера). 50% раствор азотной кислоты готовят следующим образом: к 50 мл азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 50 мл дистиллированной воды (разведение 1:1).

Техника определения белка. В узкую небольшую пробирку (тина агглютинационной) наливают 1 мл 50% азотной кислоты. В пипетку с узким оттянутым концом набирают 1 мл отфильтрованной исследуемой мочи, наслаивают на реактив и пробирку переводят в вертикальное положение. При наличии белка на границе жидкостей появляется белое кольцо. Время появления кольца, его свойства зависят от количества белка: если белка мало, то кольцо появляется не сразу, поэтому за его появлением следят в течение 2,5-3 минут. Минимальное количество белка, определяемое этим методом, 0,033°/оо. При меньшем содержании белка в моче кольцо не образуется. Учет результатов реакции производят на черном фоне в проходящем свете.

4. Реакция с 1% раствором азотной кислоты на насыщенном растворе поваренной соли - видоизмененная проба Геллера (по Ларионовой). Для проведения пробы используют 1 % раствор азотной кислоты, приготовленный на насыщенном растворе поваренной соли (реактив Ларионовой). 35 г поваренной соли растворяют в 100 мл дистиллированной поды, раствор фильтруют, к 1 мл концентрированной азотной кислоты удельного веса 1,2-1,4 приливают 99 мл приготовленного насыщенного раствора поваренной соли.

Техника определения белка такая же, как и при реакции с 50% раствором азотной кислоты (проба Геллера), но вместо 1 мл 50% раствора азотной кислоты в пробирку наливают 1 мл реактива Ларионовой и на него наслаивают 1 мл мочи. Появление белого кольца на границе жидкостей указывает на наличие белка в исследуемой моче. Проба по Ларионовой так же чувствительна, как и проба Геллера.

5. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка. Колориметрическая (сухая) проба качественного определения белка в моче основана на воздействии, которое оказывает белок на цвет индикатора в буферном растворе.

Техника определения белка. Кусочек индикаторной бумаги, предназначенный для определения белка погружают в мочу на короткое время. Пробу считают положительной, если бумажка окрашивается в сине-зеленый цвет.

Количественное определение белка в моче

Количественное определение белка в моче основано на том, что при наслаивании мочи, содержащей белок, на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой на границе двух жидкостей образуется белое кольцо, причем если четкое белое кольцо появляется к 3 минутам, то содержание белка равно 0,033%о или 33 мг в 1000 мл мочи. Появление кольца ранее 3 минут свидетельствует о большем содержании белка в моче.
При количественном определении белка в моче выполняют следующие правила:

1. Количественное определение белка производят только в тех порциях мочи, где он был обнаружен качественно.
2. Определение производят с тщательно отфильтрованной мочой.
3. Точно соблюдают технику наслаивания исследуемой мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой в соотношении реактива с мочой (1:1).
4. Время появления кольца определяют по секундомеру: при окончательном расчете количества белка учитывают время наслаивания мочи на азотную кислоту, которое равно 15 секундам.
5. Разведение мочи производят исходя из свойства кольца. При этом каждое последующее разведение мочи готовят из предыдущего.
6. Определение колец производят на черном фоне.

Наиболее распространены два метода количественно¬го определения белка в моче: метод Робертса - Стольникова - Брандберга и метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена.

1. Метод Робертса-Стольникова-Брандберга. По этому способу количество белка в моче определяют путем разведения ее до тех пор, пока при очередном наслаивании мочи на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой кольцо появится точно к 3 минутам. Расчет количества белка производят, умножая 0,033%о на степень разведения мочи. Полученный результат выражает количество белка в миллиграммах на 1000 мл мочи, т. е. в promille (%о).
2. Метод С. Л. Эрлиха и А. Я. Альтгаузена. В штатив помещают ряд агглютинационных пробирок, в которые предварительно наливают по 1 мл 50% раствора азотной кислоты или реактива Ларионовой. Исследуемую мочу берут отдельной чистой, сухой пипеткой с узким оттянутым концом и наслаивают на реактив, после чего включают секундомер. За временем появления кольца следят, располагая пробирку на черном фоне. При появлении кольца секундомер выключают.

При наслаивании мочи в зависимости от количества белка может появиться компактное, широкое или нитевидное кольцо. Компактное, широкое кольцо появляется тотчас же после наслаивания мочи на реактив. Нитевидное кольцо может появиться сразу, до истечения одной минуты, или в промежутке от одной до 4 минут.

При появлении нитевидного кольца в пределах от одной до 4 минут производить разведение мочи не нужно!
Для вычисления количества белка в этом случае достачно использовать предложенную авторами таблицу-план (табл. 1).

Пример 1. При наслаивании мочи на реактив нитевидное кольцо образовалось через 2 минуты. Если бы кольцо образовалось к 3 минутам, то количество белка было было бы равно 0,033%о.

В данном же случае кольцо образовалось раньше. Соответственная поправка, согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Это значит, что белка в данной порции мочи будет в 1+1/8 раза больше, чем 0,033°/оо, т. е. 0,033%о X(1+1/8) = 0,037°/оо.

При появлении нитевидного кольца до 1 минуты, т. е. через 40-60 секунд, производят одно разведение мочи в 1,5 раза (2 части мочи + 1 часть воды), а затем вновь наслаивают разведенную мочу на реактив и регистрируют появление кольца. При расчете результатов учитывают, что моча была разведена в 1,5 раза.

Пример 2. После наслаивания разведенной в 1,5 раза мочи нитевидное кольцо появилось к 2 минутам. Если бы кольцо появилось к 3 минутам, то белка было бы 0,033%. Соответственная поправка согласно таблице-плану, для времени в 2 минуты равна 1+1/8. Белка в моче содержится 0,033%оX1,5X(1+1/8) = 0,056%о.

Если нитевидное кольцо появляется сразу, мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). Разведенную мочу вновь наслаивают на реактив и отмечают появление кольца по истечении 1 минуты.

Пример 3. При наслаивании разведенной в 2 раза мочи на реактив нитевидное кольцо появилось через 1 минуту 15 секунд. Тогда количество белка в исследуемой моче по аналогии с прежними расчетами будет равно
0,033%оХ2Х(1+3/8) = 0,091%.
В случае появления широкого кольца мочу разводят в 4 раза (1 часть мочи + 3 части воды).
При последующем наслаивании разведенной мочи нитевидное кольцо может образоваться как до, так и по истечении одной минуты. В таких случаях расчет количества белка производят по аналогии с предыдущими примерами, т. е. 0,033% о умножают на степень разведения и на соответственную поправку.

Пример 1. Кольцо после разведения мочи в 4 раза появилось сразу же. Мочу разводят в 2 раза. После наслаивания мочи, разведенной в 8 раз (4X2), нитевидное кольцо образовалось через 1,5 минуты. В таком случае количество белка равно 0,033%оХ8X1,25 = 0,33%о и т. д.
При появлении компактного кольца мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи+ 7 частей воды). При последующем наслаивании разведенной мочи на реактив может образоваться либо компактное, либо широкое, либо нитевидное кольцо.

Пример 2. При наслаивании мочи на азотную кислоту тотчас же образовалось компактное кольцо. Мочу разводят в 8 раз (1 часть мочи + 7 частей воды) и вновь производят ее наслаивание. При этом опять получилось компактное кольцо. Тогда мочу разводят еще в 8 раз (для этого в цилиндр или в пробирку берут 1 часть разведенной мочи и прибавляют к ней 7 частей воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось сразу. Мочу разводят в 2 раза (1 часть мочи + 1 часть воды). После очередного наслаивания разведенной мочи нитевидное кольцо образовалось к 2 минутам. Расчет количества белка данной порции мочи производят так: 0,033,%оX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%о.

Помимо таблицы-плана, имеется таблица с рассчитанными цифрами белка (табл. 2). Если моча не разведена, то количество белка отыскивают в графе «Цельная неразведенная моча». При разведении мочи в целое число раз (8,4,2) используют табл. 1. При разведении мочи в 1,5 раза используют табл. 2.

Техника пользования таблицей для определения содержания белка в моче

В соответствующих графах таблицы наводят время появления кольца и степень разведения мочи.
Цифра, находящаяся в точке пересечения горизонтальной и вертикальной линий, проведенных от этих двух показателей, указывает на количество белка в исследуемой моче (%о).

Возможно, что при положительной качественной пробе на белок кольцо при наслаивании на 50% раствор азотной кислоты не образуется. Это значит, что в моче белка меньше 0,033%о. В таких случаях количество белка в бланке анализа обозначают термином «следы».

Если белок определен количественно, в бланке анализа мочи отмечают содержание белка в promille, например «белок — 0,66%о».

Помимо количественного определения белка в отдельной порции мочи, рассчитывают суточное его количество в граммах. С этой целью собирают суточную мочу, измеряют ее количество и определяют содержание белка в promille. Затем производят расчет. Например, суточное количество мочи равно 1800 мл, белок - 7°/оо. Значит, белка в суточном количестве мочи содержится: 1,8X7 = 12,6 г.